| 式中：T── | 处理死亡率； | | C── | 对照死亡率。 | 将感染液各浓度换算成对数值，校正死亡率转换成死亡机率值，用最小二乘法或有统计功能的计算器，分别求出标准品LC50值和待测样品LC50值，然后按式（2）计算待测样品的毒力效价[X2 Px IU／mg（μL）或Ha IU／mg（μL）]： 
| ……………………………………………（2） | 式中：S── | 标准品LC50值； | P── | 标准品效价； | Y── | 样品LC50值。 | 4.1.5 允许差 毒力测定法允许相对偏差，但每个样品3次重复测定结果最大偏差不得超过20％。毒力测定制剂各浓度所引起的死亡率应在10％～90％之间，在50％死亡率上下至少要各有两个浓度。 4.2 毒力测定方法二：以棉铃虫（Heliothis armigera）作试虫的测定方法[棉铃虫饲养方法见附录A（补充件）]。 4.2.1 试剂或材料 4.2.1.1 标准品：CS-95，H3ab，效价20 000 IU／mg； 4.2.1.2 棉铃虫幼虫：Heliothis armigera； 4.2.1.3 黄豆粉：黄豆炒熟后磨碎过60目筛； 4.2.1.4 大麦粉：过60目筛； 4.2.1.5 酵母粉：工业用； 4.2.1.6 36％乙酸溶液：乙酸（GB 676），化学纯，溶于蒸馏水； 4.2.1.7 苯甲酸钠：分析纯； 4.2.1.8 甲醛（GB 685）：分析纯； 4.2.1.9 维生素C：医用，分析纯； 4.2.1.10 琼脂粉：凝胶强度大于300g／cm2； 4.2.1.11 磷酸缓冲液：同4.1.1.18。 4.2.2 仪器 4.2.2.1 分析天平：精确度0.0001； 4.2.2.2 电动搅拌器：无级调速，100～6000r／min； 4.2.2.3 微波炉或电炉； 4.2.2.4 振荡器； 4.2.2.5 水浴锅； 4.2.2.6 组织培养盘：24孔； 4.2.2.7 搪瓷盘：30cm×20cm； 4.2.2.8 磨口三角瓶：250mL，具塞； 4.2.2.9 大烧杯：1000mL； 4.2.2.10 小烧杯：50mL； 4.2.2.11 试管：18mm×180mm； 4.2.2.12 玻璃珠：Φ5mm； 4.2.2.13 注射器：50mL； 4.2.2.14 标本缸； 4.2.2.15 恒温培养箱。 4.2.3 测定步骤 4.2.3.1 饲料制备 饲料配方：酵母粉（4.2.1.5）12g、黄豆粉（4.2.1.3）24g、维生素C（4.2.1.9）1.5g、苯甲酸钠（4.2.1.7）0.42g、36％乙酸（4.2.1.6）3.9mL、蒸馏水300mL。 将黄豆粉、酵母粉、维生素C、苯甲酸钠和36％乙酸放入大烧杯（4.2.2.9）内，加100mL蒸馏水湿润，另将余下200 mL蒸馏水加入琼脂粉（4.2.1.10）内，在微波炉（4.2.2.3）上加热至沸腾，使琼脂完全熔化，取出冷却至70℃，即与其他成分混合，在电动搅拌器（4.2.2.2）内高速搅拌1min，迅速移至60℃水浴锅（4.2.2.5）中加盖保温。 4.2.3.2 感染液的配制 称100.0～150.0 mg可湿性粉剂样品，精确到0.1mg，至盛有玻璃珠（4.2.2.12）的磨口具塞三角瓶（4.2.2.8）中，加磷酸缓冲液（4.2.1.11）100 mL，浸泡10 min，在振荡器（4.2.2.4）上振荡1 min即成母液。或将悬浮剂样品充分振荡均匀后，吸取1.00mL，精确到0.01mL，至盛有玻璃珠的磨口具塞三角瓶中，加磷酸缓冲液99mL，浸泡10min，在振荡器上振荡1min即成母液。于分析天平（4.2.2.1）上称取150.0～300.0mg标准品（4.2.1.1），精确到0.1mg，如上法制成母液。将样品和标准品母液用磷酸缓冲液以一定的倍数等比稀释，每个样品和标准品至少各稀释5个浓度，并设一缓冲溶液作对照，每一浓度感染液吸取3mL至50mL小烧杯（4.2.2.10）内待用，对照吸取3mL磷酸缓冲液。 4.2.3.3 饲料和感染液的混合及分装 用注射器（4.2.2.13）吸取27mL饲料，注入上述已有样品或标准品感染液的烧杯内，以电动搅拌器高速搅拌0.5min，迅速倒入组织培养盘（4.2.2.6）上各小孔中（倒入量不要求一致，以铺满孔底为准），凝固待用。 4.2.3.4 接虫感染 于26～30℃室温下，将未经取食的初孵幼虫（4.2.1.2）（孵化后12h内）抖入直径20cm的标本缸（4.2.2.14）中，静待数分钟选取爬上缸口的健康幼虫作供试虫，用毛笔轻轻地将它们移入已有感染饲料的组织盘的小孔内，每孔一头虫。每个浓度和空白对照皆放48头虫，用塑料薄片盖住，然后将组织培养盘逐个叠起，用橡皮筋捆紧，竖立放于30℃恒温培养箱（4.2.2.15）内培养72h。 4.2.4 结果检查和统计分析 用肉眼或放大镜检查死、活虫数，以细签触动虫体，完全无反应的为死虫，计算死亡率。如对照有死亡，可查Abbott校正值表或按式（1）计算校正死亡率。对照死亡率在6％以下不用校正，6％～15％之间需校正，大于15％则测定无效。将浓度换算成对数值，死亡率或校正死亡率换算成机率值，用最小二乘法或有统计功能的计算器，分别求出标准品和样品的LC50，按式（2）计算毒力效价。 4.2.5 允许差 毒力测定方法的允许偏差要求与4.1.5相同。 4.3 pH值测定 按GB／T 1601中规定的pH试纸法进行。 4.4 悬浮率测定 4.4.1 仪器和试剂 4.4.1.1 量筒：250mL，具塞，0和250刻度间距离为20～21.5cm，25mL刻度线与塞子底部之间的距离为4～6cm。 4.4.1.2 吸液管：长30～40cm， 内径0.5 cm，末端内径为0.3cm，将其变成U形，U形部分高为0.5～1.01cm，其管口向上。 4.4.1.3 秒表。 4.4.1.4 三角玻璃瓶：500 mL。 4.4.1.5 恒温水浴锅。 4.4.1.6 标准硬水：以碳酸钙计具有342ppm硬度，其配制方法按GB 5451中标准硬水配制方法进行。 4.4.1.7 三角玻璃瓶：100mL。 4.4.2 测定步骤 4.4.2.1 可湿性粉剂 称取样品200.0mg，精确到0.2mg，放入盛有玻璃珠的三角瓶（4.4.1.4）中，加入标准硬水（4.4.1.6）100mL，用手左右振荡60次。制得的悬浮液全部转移到250mL具塞量筒（4.4.1.1）中，用标准硬水加到250mL。 将量筒放入30±1℃恒温水浴锅（4.4.1.5）中，当悬浮液温度达到30℃时，将量筒盖好，拿起量筒先轻轻摇起沉淀物，然后有规律地以量筒中部为中心上下颠倒15个来回（约30s），使呈均匀的悬浮液，量筒仍放入恒温水浴中，打开盖子，静置30min后，用吸液管（4.4.1.2）以抽气法将量筒上部9／10的悬浮液抽出（在15～30s内完成）。抽液过程中吸液管应依附筒壁随液面下降而下降，勿使下部沉淀搅动，量筒内剩下1／10部分，按4.1或4.2毒力测定法测定毒力。 4.4.2.2 悬浮剂 样品摇匀后吸取5.00mL，精确到0.01mL，于100mL三角玻璃瓶（4.4.1.7）中，加入 标准硬水100mL；用手左右振荡50次。制得的悬浮液全部转移到250mL具塞量筒中，用标准硬水加到250mL，然后按4.4.2.1中 “将量筒放入30±1℃恒温水浴锅（4.4.1.5）中，……”进行。 4.4.4.3 分析结果的计算 根据式（3）计算悬浮率（X3）： | 
