NY 293—951 主题内容与适用范围 本标准规定了苏云金芽孢杆菌制剂（可湿性粉剂和悬浮剂）的技术要求、检验方法、检验规则以及标志、包装、运输、贮存。 本标准适用于微生物发酵方法制得防治鳞翅目害虫的苏云金芽孢杆菌制剂（可湿性粉剂和悬浮剂）。 本标准不适用于加有化学农药的苏云金芽孢杆菌复配制剂。 2 引用标准 GB／T 1600 农药水分测定方法 GB／T 1601 农药pH值的测定方法 GB／T 1604 农药验收规则 GB／T 1605 商品农药采样方法 GB 3796 农药包装通则 GB／T 5451 农药可湿性粉剂湿润性测定方法 HG／T 2—896 农药粉剂细度测定方法 3 技术要求3.1 外观：可湿性粉剂为灰白色—棕褐色粉，悬浮剂为棕黄色－褐色悬浮液体。 3.2 苏云金芽孢杆菌制剂还应符合表1要求： 表 1
级 别→
项目
↓
|
可湿性粉剂
| 悬浮剂 | | 优级 | 一级 | 合格 | 优级 | 一级 | 合格 | | 毒力效价〔Px IU/mg（μL）〕〔Ha IU/mg（μL）〕1） | ≥32000 | ≥16000 | ≥8000 | ≥8000 | ≥4000 | ≥2000 | | pH值 | 6.5～7.5 |
|
| 4.5～6.5 | | 细度，μm | 98％≤75μm
200（目筛） | 100％≤180μm（80目筛）
98％≤150μm（100目筛） | | 悬浮率（有效成分），％ | ≥80 | ≥80 | | 湿润时间，min | ≤3 | | | 含水量，％（m/m） | 4.0 | |
注：1） Px和Ha分别为Plutella xylostella（小菜蛾）和Heliothis armigera（棉铃虫）的缩写。 4 检验方法4.1 毒力测定方法一：用小菜蛾（Plutela xylostella）作试虫的测定方法[小菜蛾饲养方法见附录A（充件）]（仲裁法）。 4.1.1 试剂或材料 4.1.1.1 标准品：CS-95，H3ab，效价20 000 IU／mg； 4.1.1.2 小菜蛾幼虫：Plutella xylostella； 4.1.1.3 食用菜籽油； 4.1.1.4 酵母粉：工业用； 4.1.1.5 维生素C：医用，分析纯； 4.1.1.6 琼脂粉：凝胶强度大于300g／cm2； 4.1.1.7 磷酸氢二钾（HG 3—1228）：分析纯； 4.1.1.8 磷酸二氢钾（GB 1274）：分析纯； 4.1.1.9 聚山梨酯-80：粘度3.5×10－4～5.5×10－4m2／s； 4.1.1.10 菜叶粉：甘蓝型油菜叶，80℃烘干，磨碎，过80目筛； 4.1.1.11 蔗糖（HGB 3310）：分析纯； 4.1.1.12 纤维素粉CF-11； 4.1.1.13 氢氧化钾（GB／T 2306）：分析纯； 4.1.1.14 氯化钠（GB 1266）：分析纯； 4.1.1.15 15％尼泊金：对羟基苯甲酸甲酯（化学纯）溶于95％酒精； 4.1.1.16 10％甲醛溶液：甲醛（GB 685，分析纯）溶于蒸馏水； 4.1.1.17 干酪素溶液：干酪素（BR生物试剂）2g加2mL1mol／m3氢氧化钾（4.1.1.13），8 mL蒸馏水，灭菌； 4.1.1.18 磷酸缓冲液：氯化钠（4.1.1.14）8.5 g；磷酸氢二钾（4.1.1.7）6.0g，磷酸二氢钾（4.1.1.8）3.0g；聚山梨酯-80（4.1.1.9）溶液0.1mL；蒸馏水1 000mL。 4.1.2 仪器 4.1.2.1 磨口三角瓶：250mL； 4.1.2.2 分析天平：精确度0.1mg； 4.1.2.3 电动搅拌器：无级调速，100～6 000r／min； 4.1.2.4 医用手术刀； 4.1.2.5 振荡器； 4.1.2.6 水浴锅； 4.1.2.7 养虫管：9cm×2.5cm； 4.1.2.8 烧杯：50mL； 4.1.2.9 试管：18 mm×180mm； 4.1.2.10 玻璃珠：φ5mm； 4.1.2.11 移液管：10 mL。 4.1.3 测定步骤 4.1.3.1 感染液的配制 a. 标准品：用分析天平（4.1.2.2）准确称取标准品（4.1.1.1）100.0～150.0mg，精确到0.1mg，装入250mL装有10粒玻璃珠（4.1.2.10）的磨口三角瓶（4.1.2.1）中；加入100 mL磷酸缓冲液（4.1.1.18），浸泡10min，在振荡器（4.1.2.5）上振荡30min；得到浓度约为1mg／mL的标准品母液（该母液在4℃冰箱中可存放10d）；然后将标准品母液稀释成浓度为（1.000，0.500，0.250，0.125，0.062 5，0.031 3mg／mL）的六个稀释感染液。 b. 可湿性粉剂样品：称取相当于标准品毒力效价的样品适量，精确到0.2 mg，加100 mL磷酸缓冲液，然后参照标准品的配制方法配制样品感染液。 c. 悬浮剂样品：将样品用力振荡20min，充分摇匀；用移液管（4.1.2.11）吸取样品10.00mL，精确到0，01mL，加入装有90mL无菌蒸馏水的磨口三角瓶中，吸洗三次，充分摇匀得到含100uL/mL的母液；将母液稀释成含量分别为5.000，2.500，1.250，0.625，0.313和0.156μL/mL的六个稀释液。 对有些效价过高或过低的样品在测定前需先以3个距离相差较大的浓度做预备试验，估计LC50值（半致死中浓度）的范围，据此设计稀释浓度。 4.1.3.2 感染饲料的配制 饲料配方：维生素C（4.1.1.5）0.5g、干酪素溶液（4.1.1.17）1.0mL、菜叶粉（4.1.1.10）3.0g、酵母粉（4.1.1.4）1.5g、纤维素粉（4.1.1.12）1.0g、琼脂粉（4.1.1.6）2.0g、蔗糖（4.1.1.11）6.0g、菜籽油（4.1.1.3）0.2mL、10％甲醛溶液（4.1.1.16）0.5mL、15％尼泊金（4.1.1.15）1.0mL、蒸馏水100mL。 将蔗糖、酵母粉、干酪素溶液、琼脂粉加入90mL的蒸馏水中调匀；搅拌煮沸，使琼脂完全熔化，加入尼泊金，搅匀；将其他成分用剩余的10mL蒸馏水调成糊状；当琼脂冷却至75℃左右时与之充分混合，搅匀，置55℃水浴锅（4.1.2.6）中保温备用，取50mL的烧杯（4.1.2.8）7只，写好标签，置55℃水浴中预热；分别向每个烧杯中加入1mL对应浓度的感染液，缓冲液作空白对照；向每个烧杯中加入9 mL熔化的感染饲料；用电动搅拌器（4.1.2.3）搅拌20 s，使每个烧杯中的感染液与饲料充分混匀。 将烧杯静置，待冷却凝固后，用医用手术刀（4.1.2.4）将感染饲料切成1cm×1cm的饲料块，每个浓度取4个饲料块分别放入4支养虫管（4.1.2.7）中，每管放入一块，写好标签。 4.1.3.3 接虫感染 随机取已放置饲料的养虫管，每管投入10头小菜蛾三龄初幼虫（4.1.1.2），每浓度4管，塞上棉塞，写好标签，在相同饲养条件下饲养。 4.1.4 结果检查及计算 感染48 h后检查试虫的死亡情况。判断死虫的标准是以细签轻轻触动虫体，无任何反应者判为死亡。 计算标准品和样品各浓度的供测昆虫死亡率，查Abbott表或用式（1）计算校正死亡率（X1）。对照死亡率10％以下需要校正，大于10％则试验结果无效。 | 
