GB／T 12729.13—91

　　本标准等效采用国际标准ISO　1208—1982《香辛料和调味品──污物的测定》。

1  主题内容与适用范围

　　本标准规定了香辛料和调味品中污物的测定方法。

　　本标准适用于香辛料和调味品中污物的测定。

2  引用标准

　　GB／T　12729.2  香辛料和调味品　取样方法

3  定义

　　污物：在本标准所规定条件下，从制品中分离出来的无机杂质（砂、土）和动物性污物（昆虫碎片、啮齿动物的毛发和排泄物）。

4  原理

　　用三氯甲烷（5.1）洗样品（必要时，先用石油醚抽提），检查洗液中是否有重污物和砂、土。用水洗样品（用或不用胰酶处理），而后加入石油醚搅拌，将集聚在两层液体之间界面处的轻污物转移到滤纸上，用显微镜检查是否有动物性污物。

5  试剂

5.1  三氯甲烷（GB　682）：制备三氯甲烷-四氯化碳（GB　688）混合液（见8.3）。

5.2  胰酶溶液  使用符合附录A要求的胰酶，其冷藏温度为10℃。胰酶溶液如下配制：

　　将10g胰酶加入100mL温度不超过40℃的温水中混合，机械搅拌10min或在间歇搅拌下放置30min。在直径100～125mm的60°漏斗中松散地垫一块100mm厚的脱脂棉，将此溶液倒在上面重复过滤。如果过滤速度很慢，用布氏漏斗，通过快速滤纸抽滤。如果过滤速度仍然很慢，必要时重复过滤直至溶液迅速通过滤纸。（可溶性胰酶可直接通过滤纸抽滤）。每10g稀释滤液100mL。

5.3  磷酸三钠（HG 3—1292）：50g／L溶液。

5.4  甲醛溶液（GB 685）。

5.5  石油醚（HG 3—1003）：沸程30～60℃。

5.6  石油醚（HG 3—1003）：沸程60～90℃。

6  仪器

6.1  实验室常用仪器；

6.2  收集烧瓶：是一个1000mL的锥形瓶，内插一根金属棒，棒的下端装有橡皮塞。金属棒直径5mm，比瓶口高约100mm，棒的下端有螺纹，装上螺母和垫圈使橡皮塞固定在棒上。金属棒底端装有橡皮头以防打破烧瓶底部（见下图）；

6.3  烧杯：500mL；

6.4  布氏漏斗：直径15cm（用滤纸）；

6.5  布氏漏斗：直径7cm，用划有间距5mm平行线的滤纸；

6.6  定量滤纸；

6.7  瓷坩埚；

6.8  烘箱：控温80℃；

6.9  烘箱：控温103℃；

6.10  培养皿：直径80mm；

6.11  放大镜或显微镜；

6.12  分析天平。

7  取样

　　按GB／T 12729.2方法取样。

8  操作程序

　　若需要除去挥发油或脂肪，按（8.2）所述进行操作；否则直接按（8.3）所述进行操作。

8.1  试样

8.1.1  块状试样

　　称取25±0.1g的小块样品于烧杯（6.3）中。

8.1.2  粉状试样

　　称取25±0.1g样品于烧杯（6.3）中。

8.2  预先除去挥发油和脂肪

　　向装有实验样品的烧杯中加入200mL石油醚（5.5）。在水浴中缓慢煮沸15min。小心倾去石油醚，以免损失实验样品。

8.3  重污物的分离

　　将400mL三氯甲烷（5.1）加入试样（8.1）或（8.2）操作后的残留物中。放置1h，不时搅拌。然后转移到布氏漏斗（6.4）中，重残留物砂和土留在烧杯里，将漂浮于三氯甲烷液面的香辛料及三氯甲烷转移到布氏漏斗中，只剩重残留物于烧杯底部。有较多的香辛料组织留在烧杯底部时，连续加数份与四氯化碳混合的三氯甲烷，逐渐增加溶液的比重，直至所有香辛料组织转移到布氏漏斗中。将重残留物从烧杯中移到定量滤纸（6.6）上水洗除去香辛料中的氯化钠。残留物量较大时，将滤纸放在已称恒重的坩埚（6.7）中，灼烧后称量重污物。

8.4  布氏漏斗上残留物的处理

　　在80℃烘箱（6.8）中烘干布氏漏斗中的残留物（见8.3）1h。

8.4.1  不进行酶处理的操作程序

　　将残留物移入收集烧瓶（6.2），加150mL水，加热至沸，在搅拌下缓慢煮沸15min。用水洗烧瓶内壁 并冷却至20℃以下，用水稀释至600mL。

8.4.2  进行酶处理的操作程序

　　将烘干的残留物移入烧杯（6.3），加300mL水，搅匀。加50mL胰酶溶液（5.2）混合。用磷酸三钠 （5.8）调至pH8。15min后，45min后分别再次调整pH。加5滴甲醛溶液（5.4），于37～40℃中消化过夜。冷却后移入收集烧瓶（6.2），加水至600mL。

8.5  轻污物的分离

8.5.1  降下收集烧瓶的搅棒，加25mL石油醚（5.6），快速振摇1min，放置约5min，然后将水充入烧瓶至液面升至烧瓶颈内，放置30min，每5min搅拌一次。

8.5.2  旋转橡皮塞除去其上的沉积，将塞子升到烧瓶颈内，一定要使石油醚和水的界面位于塞子以上至少1cm处。安置好塞子，将塞子上收集的液体移入布氏漏斗（6.5），过滤。

8.5.3  向收集烧瓶的内容物中加15mL石油醚（5.6）。15min后重复（8.5.2）中所述操作。如果第二次萃取液中的污物量较多，从烧瓶中倾倒出大部分液体，再加入15mL石油醚（5.6）进行第三次萃取。��

8.6  轻污物的显微镜检查

        从布氏漏斗上取下载有轻污物的滤纸，放在培养皿（6.10）上，将培养皿放在103℃烘箱（6.9）中烘30　min。烘干的滤纸应紧紧地贴在培养皿底部。

　　在反射光下，用放大镜或显微镜（6.11）检查滤纸整个面积，用解剖针划下检查。

　　第一次从左到右，从上到下检查，第二次从下到上，第三次从上到下等等。

9  结果表述

9.1  重污物（见8.3）

　　记录存在的无机杂质。以质量百分率表示。

　　计算公式：