苯甲酸（mg/L）=m2×（50/20）=2.5m2………………………………（2） | 式中：m2──由标准曲线（5.7）上查得苯甲酸的含量，mg/L。 6.1.2 粘稠或固体样品 苯甲酸的含量以mg/kg表示，按式（3）计算： 苯甲酸（mg/kg）=m2×（50/m1）………………………………………（3） | | 式中：m1── | 称取试样的重量（5.2），g； | | m2── | 标准曲线（5.7）上查得苯甲酸含量，mg。 | 6.2 允许差 同一分析人员对同一试样两个平行测定值之差不得超过10mg/L或10mg/kg。 第 二 篇
分子吸收分光光度法7 原理 用乙醚从酸化的试样中提取苯甲酸，随后消化、还原，与盐酸羟胺进行莫尔氏反应。于分光光度计上测定已得到的红色化合物吸光度。 8 试剂和溶液 所有试剂应是分析纯，水用蒸馏水或相当纯度的水。 8.1 苯甲酸标准溶液：浓度为1g/L。 称取100mg苯甲酸精确至0.0001g，溶解于25mL的0.1mol/L氢氧化钠溶液中并用水稀释至100mL。此标准溶液含苯甲酸1mg/mL。 8.2 硝化液 23g硝酸钾（GB 647）溶解于250mL浓硫酸（ρ20=1.84g/mL）中。 8.3 盐酸羟胺（HG 3—997）溶液，20g/L。 8.4 浓氨溶液（GB 631）（ρ20=0.910g/mL）。 8.5 酚酞溶液 1g酚酞（HGB 3039）溶解于100mL60％，乙醇（v/v）中。 8.6 氢氧化钠（GB 1266—77）溶液，1mol/L。 8.7 氢氧化钠溶液，0.1mol/L。 8.8 硫酸溶液，25％（m/m）。 8.9 卡瑞（Carrez）I溶液： 150g三合水亚铁氰化钾（GB 1273）〔K4Fe（CN）·3H2O〕溶解于水中稀释至1000mL。 8.10 卡瑞（Carrez）Ⅱ溶液： 300g七合水硫酸锌（GB 666）（ZnSO4·7H2O）溶解于水中并稀释至1000mL。 8.11 乙醚（HG 3—1002），近期重蒸馏。 9 仪器、设备 常用实验室仪器、设备，包括： 9.1 分液漏斗，200mL，装有磨口塞。 9.2 移液管，1、2、5、10、25和50mL。 9.3 移液管，2mL、分刻度至0.1mL。 9.4 容量瓶，10和100mL备有磨口玻璃塞。 9.5 沸水浴。 9.6 试管，直径1.5或2.0cm。 9.7 烘箱，能控温在103±2℃。 9.8 恒温水浴，控温在20±2℃和60±2℃。 9.9 分光光度计，适合于533nm波长处进行测量，备光径长10mm的比色杯。 10 分析步骤10.1 试样的制备 10.1.1 液体样品 试样充分混匀。 10.1.2 半粘稠样品 将试样混合完全。取部分试样通过四层纱布压汁，弃去初始几滴滤液，收集剩余的部分进行测定。 10.1.3 粘稠样品 试样充分混匀。 10.2 试样的分取 10.2.1 液体样品 用移液管（9.2），取10mL试样移至200mL分液漏斗（9.1）中。 10.2.2 粘稠样品 称取试样10g，准确至0.01g，加少量水，加2滴酚酞溶液（8.5），再加氢氧化钠溶液（8.5）使之呈碱性。放在沸水浴（9.5）上加热30min。冷却后，移至100mL容量瓶中，加入2mL卡瑞（Carrez）I溶液（8.9）和2mL卡瑞（Carrez）Ⅱ溶液（8.10），用水稀释至刻度。放置30min，然后离心或过滤。该澄清的溶液用于提取（10.3）。 10.3 苯甲酸的提取和纯化 10.3.1 液体样品 加2mL硫酸溶液（8.8）至盛有试样的分液漏斗中。加25mL乙醚（8.11），振荡分出醚层，用25mL乙醚再重复振荡提取一次，合并乙醚相。 加1滴酚酞溶液（8.5）加2mL氢氧化钠溶液（8.6）并振荡5min。分离碱相。然后用2mL氢氧化钠溶液（8.7）振荡提取2次。收集碱相提取液于10mL容量瓶（9.4）中并用水稀释至刻度。 10.3.2 粘稠样品 50mL澄清后的溶液（10.2.2）于200mL分液漏斗中，加50mL硫酸溶液（8.8），加50mL乙醚，振荡，分出醚层。用50mL乙醚重复提取两次以上。合并乙醚相于分液漏斗中。加5mL水，振荡，并弃去水相。 加2mL氢氧化钠溶液（8.6）于醚层，振荡（形成苯甲酸钠）分出碱相，然后用2mL氢氧化钠溶液（8.7）再振摇提取2次。收集碱相提取液于10mL容量瓶（9.4）中，并用水稀释至刻度。 10.4 测定 10.4.1 显色 根据苯甲酸含量，取0.5～1.0mL碱提取液移入试管（9.6）中，在沸水浴（9.5）上蒸发至干。移至烘箱（9.7）中，在103±2℃下干燥15min。 随后冷却，加1mL硝化液（8.2）放在沸水浴上加热20min（开始时振摇试管几分钟）。 移入水浴（9.8），保持在20±2℃下，放置15min。小心的加2mL水，再放置15min。加10mL氨溶液
（8.4），分次加，最初的5mL，每次加0.5mL，剩余的每次加1mL。放在水浴上15min。注意水浴的温度控制在20±2℃。加2mL盐酸羟胺溶液（8.3）并放在60±2℃水浴（9.8）上保持5min。 10.4.2 分光光度计测量 冷却试管，移入比色杯。在30min之内用分光光度计，在533nm波长处，以试剂空白为对照，测量溶液的吸光度。 同一试样作平行测定。 10.5 标准曲线的绘制。 10.5.1 标准系列溶液的制备 用移液管（9.3）连续向5支试管中转移苯甲酸标准溶液（8.1）0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，相对应的苯甲酸量为0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mg。 向另1支试管中移入氢氧化钠溶液（8.7）0.5mL作试剂空白。 10.5.2 显色 将试管移入沸水浴中蒸发至干。然后将试管移入烘箱中，并在103±2℃下干燥15min。以下步骤按10.4.1第二段起所描述的进行。 10.5.3 分光光度测量 按10.4.2规定的操作进行。 10.5.4 标准曲线的绘制 以苯甲酸标准溶液的毫克数为横坐标，以所对应的吸光度为纵坐标，绘制曲线。 11 分析结果表示11.1 计算方法和公式 11.1.1 液体样品 苯甲酸的含量以mg/L表示，按式（4）计算： | 
