GB 12289—90 本标准参照采用国际标准ISO 5518—1978《水果、蔬菜及其制品苯甲酸含量的测定──分光光度法》和ISO 6560—1983《水果、蔬菜及制品苯甲酸含量的测定（含量超过200mg/L或kg）—分子吸收分光光度法》。 1 主题内容及适用范围 本标准规定了水果、蔬菜及制品中苯甲酸含量的测定方法。分光光度法适用于苯甲酸含量低于200mg/L或kg产品的测定。分子吸收分光光度法适用于测定苯甲酸含量超过200mg/L或kg的产品，重点包括水果汁、蕃茄酱制品，以及用醋或乳酸保存的产品。 分光光度法不适用于对氯苯甲酸及有大量肉桂酸存在的产品。 第 一 篇
分光光度法2 原理 试样混匀后，稀释、酸化、用乙醚提取苯甲酸，在碱性条件下重提，通过铬酸氧化提纯，最后用分光光度计测定溶解在乙醚中的苯甲酸。 3 试剂和溶液 本标准所用试剂均为分析纯。使用蒸馏水或相应纯度的水。 3.1 酒石酸（Q/HG 10—2187），结晶状； 3.2 氢氧化钠（GB 1266）溶液，1mol/L； 3.3 重铬酸钾（GB 642）溶液，33～34g/L（w/v）； 3.4 硫酸溶液，2+1，用2体积的浓硫酸（GB 625）ρ201.84g/mL，加到1体积的水中； 3.5 乙醚（HG 3—1002），重新蒸馏； 3.6 苯甲酸标准溶液：0.100g/L乙醚溶液； 3.7 碳酸氢钠（GB 640）。 4 仪器、设备 常用实验室仪器、设备、包括： 4.1 容量瓶，50mL； 4.2 烧杯，50、100mL； 4.3 移液管，20mL； 4.4 刻度吸管； 4.5 锥形瓶，250mL具有磨口玻璃塞； 4.6 分液漏斗，500mL； 4.7 恒温水浴，温度能控制在70～80℃； 4.8 捣碎机； 4.9 紫外分光光度计：具光径长10mm的石英比色杯； 4.10 分析天平。 5 分析步骤5.1 试样的制备 5.1.1 液体样品（汁液），可流动浆液（糖浆）和粘稠的样品（果酱）。将样品混合均匀。 5.1.2 固体样品（水果、蔬菜），将样品切成小块，检出种子和果壳，混匀，取约40g放入捣碎机中捣碎。冷冻样品首先在密闭的容器内融化，将融化液与样品合并后捣碎。 5.2 试样的分取 5.2.1 液体样品 用移液管（4.3）吸取20mL无悬浮物的试样（5.1）用约50mL水稀释并转移至500mL的分液漏斗（4.6）（分液漏斗A）中。或用感量为0.01g的天平称取试样20.00g。 5.2.2 流动的浆液 取20mL试样（5.1）放在研钵里用20mL水稀释，倾倒过滤。然后连续两次用20mL水溶解残渣，倾倒过滤，收集滤液于500mL分液漏斗（4.6）（A）中。也可用百分之一天平称取20.00g试样。 5.2.3 粘稠或固体样品 用百分之一天平称取10.00g样品（5.1），放入250mL锥形瓶（4.5）中，加30～40mL的水。加入约50mg碳酸氢钠（3.7），然后放在水浴（4.7）上，温度控制在70～80℃，放置15～30min后，过滤瓶中的内容物，并用15～20mL水冲洗两次，全部滤液并入500mL分液漏斗（4.6）（A）中，使之冷却。 5.3 苯甲酸的提取 5.3.1 取1g酒石酸（3.1）放入装有稀释试样（5.2）的分液漏斗（A）中，加入60mL的乙醚（3.5）并小心摇动。静置使之分层。保留醚层，将水层转入第二个500mL分液漏斗（4.6）（B）中，用60mL乙醚萃取水相，合并乙醚相于分液漏斗（A）中。 5.3.2 从乙醚相提取苯甲酸，连续加入氢氧化钠溶液（3.2）10mL、5mL，水10mL两次，每加一次及时摇动，使之分层，收集水相于蒸发皿中，将皿放在水浴（4.7）上，温度控制在70～80℃，浓缩碱溶液体积至一半为止。 5.4 苯甲酸的提纯 冷却后，将蒸发皿的内容物放入盛有20mL硫酸溶液（3.4）和20mL重铬酸钾溶液（3.3）的250mL锥形瓶（4.5）中。盖塞，摇匀，放置1h以上。 5.5 苯甲酸的萃取 用20～25mL的乙醚萃取上述（5.4）提纯的苯甲酸两次，收集乙醚液，用5mL的水洗乙醚溶液两次，然后小心的倾出乙醚并通过干滤纸过滤至50mL的容量瓶（4.1）中，用乙醚冲洗滤纸并定容至刻度。 5.6 测定 用分光光度计（4.9）在267.5，272和276.5nm波长处以纯乙醚为对照，测量乙醚层（5.5）的吸光度。 苯甲酸的吸光度A按式（1）计算： A=A2-〔（A1+A3）/2〕………………………………………………（1） | | 式中：A1── | 在267.5nm的吸光度； | | A2── | 在272nm的吸光度； | | A3── | 在276.5nm的吸光度。 | 同一试样（5.1）需进行两次测定。 5.7 标准曲线的绘制 向6个50mL容量瓶（4.1）中分别加入苯甲酸标准溶液（3.6），各5.0、7.5、10.0、12.5、
15.0、20.0mL，用乙醚（3.5）稀释至刻度。该标准系列溶液的浓度为10、15、20、25、30、40mg/L。 按照5.6进行测定。 以苯甲酸含量mg/L为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线。 6 分析结果表示6.1 计算方法和公式 6.1.1 液体样品 苯甲酸的含量以mg/L表示，按式（2）计算： | 
