GB／T 13596—92

　　本标准参照采用ISO 4389《烟草和烟制品—有机氯杀虫剂，残留量的测定》（参考方法）。

1　主题内容与适用范围

　　本标准规定了测定烟叶中有机氯杀虫剂残留量的一种方法。

　　该方法适用于测定烟叶中六六六（BHC）、敌敌涕（DDT）和异构体及代谢物的残留量。

有机氯杀虫剂及测定范围

2  取样

2.1  数量

　　取样以检验批为单位，每检验批最多不超过1000件，每批包装和等级必须是同一的。

　　50件以下取2件；

　　51～100件取4件；

　　101～150件取5件；

　　151～200件取6件；

　　200件以上每增50件（不足50件按50件计）增取1件。

2.2  方法

　　打开一件烟叶的一端，分左、中、右三个部位随机取3点，每件取3把。未扎把者，拣取叶片，所取的叶片样品装入塑料袋内，密封作为原始样品。

2.3  样品制备

　　将取回的原始样品全部或随机地取部分切丝，切成宽约1mm的烟丝，用四分法缩分出均匀样品二份（每份250g），作实验室样品（试样）供检验和复验用。实验室样品必须立即密封并填写标签，注明品名、日期、垛位、报验号、申请单位、取样人。

3  测定

3.1  原理

　　烟叶样品中六六六、滴滴涕用石油醚提取，经浓硫酸净化后用气相色谱法测定，与标准农药比较定量。

　　电子捕获检测器对于负电性强的化合物具有较高的灵敏度，利用这一特点，可分别测出微量的六六六和滴滴涕及其不同异构体和代谢物。

3.2  仪器

3.2.1  气相色谱仪并配备下列装置

3.2.1.1  电子捕获检测器；

3.2.1.2  玻璃色谱柱2m（长）×3mm（内径）；

　　色谱柱填充物：1.5％OV-17＋2％   QF1混合液涂于Chromosorb W-AW-DMCS（80～100目）。

3.2.2  微量注射器：10μL。

3.2.3  脂肪提取器：150mL。

3.2.4  K-D浓缩器或真空旋转蒸发器。

3.2.5  气流吹氮浓缩装置。

3.2.6  容量瓶：5mL。

3.2.7  分液漏斗：250mL。

3.2.8  脱脂棉和滤纸筒：

　　用丙酮-石油醚〔2∶8（V／V）〕混合液回流6h后，取出挥干，保存在清洁容器中备用。

3.3  试剂

3.3.1  石油醚：沸程60～90℃重蒸。取300mL在旋转蒸发器中浓缩至5mL，在与测定方法相同的色谱条件下，取5μL进行测定，除石油醚峰外的其他峰高不得超过相当于2×10^－11g的γ-BHC的峰高。

3.3.2  蒸馏水：取蒸馏水100mL，用石油醚10mL提取，在与测定方法相同的色谱条件下，取5μL提取液进行测定，应无石油醚以外的峰。

3.3.3  苯：分析纯，重蒸馏。

3.3.4  无水硫酸钠：分析纯，300℃烘烤4h贮于密封瓶中备用。

3.3.5  浓硫酸：化学纯。

3.3.6  农药标准溶液

3.3.6.1  标准农药的含量大于99％。

3.3.6.2  标准溶液的配制：准确称取适量的α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、pp′-DDE、Op′-DDT、
pp′-DDD、pp′-DDT。

　　用少量的苯溶解，然后用石油醚分别配制成浓度为0.100mg／mL的储备液。根据需要再配制成适用浓度的混合工作标准溶液。

3.4  步骤

3.4.1  提取：称取2.4条制备好的样品4.0g放入滤纸筒中，然后置于250mL脂肪抽提器里，加入80mL石油醚于提取瓶中，在90℃水浴中迥流提取6h（迥流速度，每小时4～6次）冷却后将脂肪瓶中提取液转入250mL分液漏斗中，并用10mL石油醚分三次洗脂肪瓶，洗液并入分液漏斗中。

3.4.2  净化：将分液漏斗中的石油醚提取液加入浓硫酸9mL，振摇数下后，把分液漏斗倒置，打开活塞放气，然后振摇1min，静置分层后弃去硫酸层，需重复2～4次直至石油醚层透明无色为止，然后加50mL2％硫酸钠水溶液振摇1min，静置分离水层，继续用2％硫酸钠水溶液洗至中性，石油醚层经无水硫酸钠10g脱水后置K-D浓缩器或旋转蒸发器里，定容5mL，待气相色谱分析。

3.4.3  色谱测定

3.4.3.1  气相色谱操作条件

　　a.  载气：氮气（纯度99.999％），流量70mL／min；

　　b.  柱温：185℃；

　　c.  进样口温度：220～230℃；

　　d.  检测器温度：210℃。

3.4.3.2   准确地取适量上述净化后的试样浓缩液，作为色谱测定的样液，同时选择与样液中农药含量情况相近的工作标准溶液进行色谱测定。