GB 10219—88

1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了检测菜籽油中芥酸的方法。

　　本标准适用于测定油菜籽中油和菜籽油的芥酸含量。

2 原理

　　将菜籽油中脂肪酸甘油酯转化为脂肪酸甲酯后，进行气相色谱测定，按校正峰面积归一化法计算其结果。

3 仪器设备及操作条件

3.1 气相色谱仪

3.1.1 备有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪。

3.1.2 色谱柱：1～3m×2～4mm（内径）的玻璃柱或不锈钢柱。

3.1.2.1 色谱柱老化条件

　　将色谱柱与检测器相连的一端脱开，在185℃下，老化16h，其载气流速为20～60mL/min。再将柱箱温度升至195℃，继续老化2h。

3.1.2.2 色谱柱的性能指标

　　配制混有大致等量的硬脂酸甲酯和油酸甲酯的正已烷（或石油醚）溶液。调节样品浓度、进样量、柱温和载气流速，使硬脂酸甲酯的出峰时间在15min以内，其峰高应约为记录纸满刻度的四分之三。

　　用公式（1）计算理论塔板数：

　　用公式（2）计算分辨率：

图 1　色谱柱柱效测定示意图

　　理论塔板数（n）最小应为2000，分辨率（R）最小应为1.25。且亚麻酸甲酯与花生一烯酸甲酯也应分开。当色谱柱使用一定期限后，分辨率（R）会逐渐变小。当小于其规定值时，就必须更换新的色谱柱。

3.1.3 载体：酸洗硅藻土色谱载体（如国产101白色酸洗载体及 Chromosorb W A W等），60～100目。

3.1.4 固定液：5％～20％的聚酯型固定液，如聚丁二酸二乙二醇酯（DEGS）或聚丁二酸丁二醇酯（BDS）等。也可使用其他适宜的固定液。

3.2 分析天平：感量0.1mg；

3.3 高速捣碎机；

3.4 小型粉碎机；

3.5 小型榨油机；

3.6 电热恒温水浴锅；

3.7 电热恒温干燥箱；

3.8 冷渗管（见图2）；

图 2　冷渗管示意图

3.9 酯化瓶：具塞，50～100mL，标准磨口，备有与其相配套的冷凝管；

3.10 微量注射器：10μL，最小刻度0.1μL；

3.11 研钵；

3.12 烧杯、锥形瓶、具塞试管、移液管、量筒等。

4 试剂和溶液

　　所有试剂都为分析纯；水为蒸馏水。

4.1 正已烷；

4.2 石油醚（HG 3—1003—76），沸程30～60℃或60～90℃；

4.3 无水乙醚（HG 3—1002—76）；

4.4 无水硫酸钠（HG 3—123—76）；

4.5 正庚烷；

4.6 氢氧化钾（GB 2306—80）；

4.7 无水甲醇（GB 863—79）；

4.8 钠；

4.9 氢氧化钾-甲醇溶液（0.4mol/L）：称取约2.3g氢氧化钾（4.6）溶于100mL无水甲醇（4.7）中，贮入具塞瓶中备用；

4.10 甲醇钠溶液：含1％钠的无水甲醇（4.7）溶液。从试剂罐的溶剂中取出约1g钠，用滤纸除去上面粘附着的溶剂，溶解于100mL无水甲醇中，等气泡放完并冷却后，贮入棕色瓶中备用，瓶塞上最好装有一硅胶干燥管；

4.11 石油醚-乙醚溶液：1：1（V/V）；

4.12 盐酸-甲醇溶液：1mol/L；

4.13 石英砂、沸石。

5 测定步骤：

5.1 操作条件

5.1.1 柱箱温度：175～190℃；

5.1.2 汽化室温度：200℃左右；

5.1.3 检测器温度：190～250℃；

5.1.4 载气：干燥的氮气，其氧含量应小于10ppm，其流速为15～60mL/min。

5.1.5 氢气：纯度为99.9％，无有机杂质，其流速与载气相等。

5.1.6 空气：碳氢化合物以甲烷计应小于2ppm，其流速约为氢气的5～10倍。

5.2 油样制备

　　所制备的油样应是干燥、洁净的。可视具体条件选用下列方法：

5.2.1 称取油菜籽均匀样品约10g，精确至0.1g，在80℃下干燥2h，装入试管中，加入适量石油醚-乙醚溶液（4.11），用高速捣碎机捣碎，过滤（见图2B），蒸发并回收溶剂，贮入具塞瓶中备用。也可直接吸取滤液2mL，加入约1mL氢氧化钾-甲醇溶液（4.9）进行甲酯化反应（见5.3.1）。

5.2.2 称取油菜籽均匀样品约10g，精确至0.1g，80℃下干燥2h，倒入研钵中，加入适量石英砂和无水硫酸钠（4.4）研碎。也可先用粉碎机粉碎，再加入适量无水硫酸钠（4.4）拌匀。在冷渗管底部塞上适量脱脂棉，加入约1cm厚的无水硫酸钠（4.4），再加入经研碎的油菜籽样品约5g，后倒入15～20mL石油醚（4.2），让其经冷渗流入管一小烧瓶，重复上述操作2次，蒸发并回收溶剂，将油贮入具塞瓶中备用（见图2A）。

5.2.3 用小型榨油机榨取油样，并通过冷渗管过滤（见图2B），以除去水分和杂质。

5.2.4 如样品是菜籽油，应通过冷渗管过滤。（见图2B）。

5.3 脂肪酸甲酯的制备及测定

　　可视具体条件选择下列方法：

5.3.1 称取100～250mg菜籽油样，精确至1mg，装入10mL具塞试管中，加入石油醚-乙醚溶液（4.11）约2mL，稍事振摇，待油样溶解后，再加入氢氧化钾-甲醇溶液（4.9）约1mL，混匀，在室温下放置约30min，再沿瓶壁加入水，静置，待分层后，吸取上清液0.5～2μL进行气相色谱测定。

5.3.2 称取100～250mg菜籽油样，精确至1mg，放入酯化瓶中，加入5mL甲醇钠溶液（4.10）及沸石数粒，接上冷凝管，加热回流约15min，直至油珠消失，再由冷凝管加入约6mL盐酸-甲醇溶液（4.12），继续加热回流约10min，停止加热，冷却后，取下冷凝管，将酯化瓶中的溶液倒入分液漏斗，加入10mL水和10mL正庚烷，猛烈振摇2min，分层后，弃去水相，将上层正庚烷溶液过滤（见图2B），吸取0.5～2μL正庚烷溶液进行气相色谱测定。

6 测定结果的计算

6.1 测定结果按校正峰面积归一化法计算。

6.1.1 校正因子的测定：按菜籽油样品各脂肪酸的组成比称取脂肪酸甲酯溶于正已烷中，配制成混合脂肪酸甲酯标准样品。将配制好的混合脂肪酸甲酯标准样品，按测定一般样品的操作条件进行气相色谱测定。

　　标准样品第i组分的质量百分比M_ｉ，按式（3）计算：