GB/T 15665─1995

　　本标准非等效采用国际标准ISO 2164：1975《豆类──配糖氢氰酸测定》方法。

1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了豆类配糖氢氰酸测定方法。

　　本标准适用于豆类配糖氢氰酸测定。

2 引用标准

　　GB 601 化学试剂 滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备

3 原理

　　豆类中配糖体氢氰酸经水解后，进行水蒸气蒸馏，蒸出的氢氰酸被碱液吸收，以碘化钾作指示剂，用硝酸标准溶液滴定氢氰酸，银离子首先与氢氰酸根离子络合反应，形成可溶性络合物〔Ag（CN）₂〕，到达终点时，多余的硝酸银与碘离子反应，生成持续浑浊沉淀，指示终点，以消耗硝酸银标准溶液的用量，计算氢氰酸的含量。

4 试剂

　　全部试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。

4.1 乙酸钠溶液：2％（W/V），称取20g乙酸钠（GB 693）溶于水，用乙酸调至pH5.0±0.5，加水至1000mL。

4.2 磷酸二氢钾溶液：2％（W/V），称取20g磷酸二氢钾（GB 1274）溶于水，稀释至1000mL。

4.3 氢氧化钠溶液：5％（W/V），称取50g氢氧化钠（GB 629），溶于水，稀释至1000mL。

4.4 氨溶液：6mol/L，量取400mL氨水（GB 631），加水稀释至1000mL。

4.5 碘化钾溶液：5％（W/V），称取50g碘化钾（GB 1272），溶于水，稀释至1000mL。

4.6 硝酸银标准溶液：0.004mol/L，按GB 601制备标定。

4.7 甜杏仁。

5 仪器、设备

5.1 水蒸气蒸馏装置：蒸馏烧瓶2000～2500mL。

5.2 凯氏瓶：1000mL。

5.3 锥形瓶：250mL。

5.4 容量瓶：250mL。

5.5 移液管：100mL。

5.6 微量滴定管：10mL。

5.7 分析天平：感量0.001g。

5.8 冰浴。

5.9 粉碎机：要求容易清洗，粉碎时不致发高热而影响样品中的水分含量。

5.10 筛：孔径1mm。

5.11 培养箱：温度控制在38±2℃。

6 分析步骤

6.1 试样的选取与制备

　　选取有代表性的样品，按四分法缩减取样，取样量不得少于300g。样品用粉碎机（5.9）磨碎，过筛（5.10），弃去初始的少部分粉样，收集其余粉样于广口瓶中，以备测试之用。

6.2 试样水解

6.2.1 水解法

　　称取20g试样，精确到0.1g，置于1000mL凯氏瓶（5.2）中，加入50mL水和10mL乙酸钠溶液（4.1）或磷酸二氢钾溶液（4.2），塞紧瓶口，充分混匀，将其放在38℃培养箱（5.11）中水解12h。

6.2.2 酶解法

　　称取20g试样，精确至0.1g，置于1000mL凯氏瓶（5.2）中，加入2个碎裂甜杏仁（不含氢氰酸）
1.5～2.0g，加入50mL水，塞紧瓶口，将其放在38℃培养箱中酶解2h。

　　注：6.2.1和6.2.2这两种解法，可任选一种。酶解法较适合于那些酶活性不强的样品。

6.3 试样蒸馏

　　将水解后的试样，置冰浴上冷却15～20min，加入80mL水和一滴消泡剂，立刻将凯氏瓶连接到蒸馏装置（5.1），使冷凝管下端浸入盛有20mL氢氧化钠溶液（4.3）的锥形瓶（5.3）液面下，通入蒸汽进行蒸馏，收集100～150mL馏出液。取下锥形瓶时，冲洗冷凝管末端，将馏出液转移到250mL容量瓶中，定容。

6.4 滴定

　　用移液管（5.5）取两份100mL馏出液分别置于2个锥形瓶中，加2mL碘化钾溶液（4.5）和1mL氨溶液（4.4），混匀，在墨色背景衬托下，用硝酸银标准溶液（4.6）滴定，直至出现持续浑浊沉淀为终点。

6.5 当用上述程序滴定时，若出现浅黑色沉淀或褐色沉淀说明有S^-2离子存在，则按下列方法测定：

　　分别吸取两份100mL馏出液于2个烧杯中，加入5mL硝酸铅溶液（5g/L）进行混合，静置15min，过滤，每次用10mL水洗涤烧杯和过滤三次，再加入2mL碘化钾溶液（4.5）和1mL氨溶液（4.4）到溶液中混合。用硝酸银标准溶液（4.6）滴定。

6.6 空白测定

　　蒸馏水代替馏出液，按6.4进行空白试验。

7 结果计算

7.1 结果表示

　　配糖氢氰酸的含量以每公斤样品氢氰酸（HCN）的毫克数表示，按下式计算：